分子荧光光谱法测定水杨酸和乙酰水杨酸

A. 实验原理
乙酰水杨酸通常称为阿司匹林，其水解能生成水杨酸，而阿司匹林中或多或少存在着水杨酸。由于二者都有苯环，也有一定的荧光效率，所以可在以三氯甲烷为溶剂的条件下用荧光光谱法測定。在1%（体积分数，下同）乙酸-氯仿中，由于二者的激发波长和发射波长均不相同，可利用此特点，在其各自的激发波长和发射波长下分别測定。加少量乙酸可以增加二者的荧光强度。
为了消除药片之间的差异，可取5-10片药片一起研磨成粉末，然后取一定量有代表性的粉末样品（相当于一片的量）进行分析。
B. 仪器、试剂
1．仪器
F97PRO荧光分光光度计；电子天平。
容量瓶(50 mL、100 mL、：1000 mL);移液管(5 mL、10 mL);1%乙酸-氯仿溶液。
2．试剂
水杨酸（分析纯）；  乙酸（分析纯）；氯仿（分析纯）；水杨酸（分析纯）；阿司匹林（分析纯）。
3．标准溶液的配制
(1)乙酰水杨酸储备液（400μg·mL^-1）：称取0.4000 g乙酰水杨酸溶于1%乙酸-氯仿溶液中，用1%乙酸-氯仿溶液定容于1000 mL容量瓶中。
(2)水杨酸储备液（750μg·mL^-1）：称取0.750 g乙酰水杨酸溶于1%乙酸-氯仿溶夜中，并用其定容于1000 mL容量瓶中。
C. 实验步骤
1．绘制激发光谱和发射光谱
将乙酰水杨酸和水杨酸储备液分别稀释100倍（可每次稀释10倍，分两次完成）。用该溶液分别绘伟水杨酸和水杨酸的激发光谱和发射光谱，并分别确定它们的最大激发波长和最大发射波长。
2．制作标准曲线
(1)乙酰水杨酸标准曲线：在5个50 mL容量瓶中，用移液管分别加入4.00μg·mL^-1酰水杨酸溶液2.00 mL、4.00 mL、6.00 mL、8.00 mL、10.00 mL，用1%乙酸-氯仿溶液稀释至刻度，摇匀。在选定的激发波长和发射波长分别测量它们的荧光强度。
(2)水杨酸标准曲线：在5个50 mL容量瓶中，用移液管分别加入7.50 μg·mL^-1杨酸溶液2.00 mL、4.00 mL、6.00 mL、8.00 mL、10.00 mL，用1%乙酸-氯仿溶液稀至刻度，摇匀。在选定的激发波长和发射波长分别测量它们的荧光强度。
3．样品中乙酰水杨酸和水杨酸的测定
将5片阿司匹林药品称量后研磨成粉末，准确称取400.0 mg粉末，用1%乙酸-氯仿容液溶解，全部转移至100 mL容量瓶中，用1%乙酸-氯仿溶液稀释至刻度。迅速通过滤纸过滤，用该滤液在与标准溶液相同条件下测量水杨酸的荧光强度。
将上述滤液稀释1000倍（分三次稀释完成），在与标准溶液相同条件下测量乙酰水杨酸的荧光强度。 
D. 注意事项
阿司匹林药片溶解后，必须在1h内完成测定，否则乙酰水杨酸的含量将降低。