紫外可见分光光度计用途及定量分析方法

紫外可见分光光度计常见的三种用途：

第一种用途：对物质进行分析鉴定，紫外可见分光光度计在制药行业有着很大的前景。根据国内外的书籍记载，已经把很多的药品紫外线吸收波长和相对应的详细参数记录起来，给药品分析带来了很大的方便。

第二种用途：对比分析，把需要测定的样品与标准样品放在同等环境下进行测量。如果两种样品得到的检测结果完全一样，就表明这两种样品是同种物质。要是没有标准样品的话，可以选择跟已知的标准图谱对比分析，这种办法对仪器的要求相当高，检测环境要求极高。

第三种用途：紫外可见分光光度计在化学学科上的应用，其可以检验化学物质的纯度，同时也可以推算物质的原子结构，还可以对物质之间的氢键进行测定。特别是在有机化学方向的运用，前景更是广阔，能够对成分比较复杂的有机化合物进行成分鉴定。

定量分析是紫外可见分光光度计应用中的最主要用途。这里简要介绍7种定量分析方法：
(1)绝对法  目前，绝对法是紫外可见分光光度计诸多分析方法中使用最多的一种方法。
(2)标准法 
(3)比吸收系数法  比吸收系数法多用于测定样品溶液的浓度。但是，根据比耳定律，被测试样溶液的浓度与吸光度应呈直线关系，而在实际测试中，如果试样的浓度较高时，会发现实际测量到的吸光度值偏离线性关系。这种偏离比耳定律的原因，是由于紫外可见分光光度计的杂散光、噪声、基线平直度和光谱带宽，以及试样的前处理、试样的化学平衡等所引起的。因此，一般情况下，不采用这种方法。
(4)标准曲线法  紫外可见分光光度计最常用的定量分析方法是标准曲线法。首先，用标准物质配制一定浓度的溶液，然后，将该溶液配制成一系列的标准溶液。在一定波长下，测试每个标准溶液的吸光度，以吸光度值为纵坐标，标准溶液对应的浓度值为横坐标，绘制标准曲线。最后，将样品溶液按标准曲线绘制程序测得吸光度值，在标准曲线上查出样品溶液对应的浓度或含量。 
(5)最小二乘法  最小二乘法实际上也就是回归方程法。因为，分光光度法中试样的吸光度A与试样的浓度C之间的关系可用一条直线来描述。即c=aA+b（o、6为常数）。
应注意两点：
①回归方程是在特定条件下求得的，不能随便套用；
②分光光度法中试样的吸光度A与试样的浓度c之间的关系，应建立在回归方程中的取值范围内，否则，不能随便外推。
(6)解联立方程法  解联立方程法只适用于两个以上、在紫外区吸收峰互不重叠组分的测定，也不是常用的方法。
(7)示差分光光度法  不差分光光度法也不是紫外可见分光光度计应用中常用的方法。
应注意三点：
①示差分光光度法中最重要的是选择适当浓度的参比溶液，参比溶液越接近样品溶液，则测定的结果就越准确；
②示差分光光度法解决了普通分光光度法中不适用的高含量或痕量物质的分析问题；
③示差分光光度法要求紫外可见分光光度计的稳定性好、灵敏彦高（噪声小、杂散光小）。