荧光分光光度计测量量子产率

荧光量子产率光谱校正方法

由于受到激发光源、单色器和光电接收器的光谱特征的影响，不同荧光分光光度计记录的荧光光谱并不相同。这样的光谱称为实验光谱或者未经校正的激发光谱，不能用来计算物质的荧光量子产率，所以需要对这些光谱进行校正。

注：仪器出厂之前存有校正光谱，用户可根据需求重新校正。

1、激发光谱的测量和校正

校正荧光分光光度计激发光谱时，将罗丹明B标准溶液放进样品室内的样品架上。由于罗丹明B标准溶液在200-600nm波长范围内的激发光谱应为一水平直线，所以可以用来校正荧光分光光度计200-600nm波长范围内的激发光谱特征。

1.1、操作步骤

（1）将罗丹明B标准溶液放进样品室标准样品架

（2）打开设置点击光谱校正按钮进入光谱校正界面

（2）选取激发（200-600nm）选项，点击测量，系统会自动更新现有图谱。

2、发射光谱的测量和校正

校正发射光谱时，分两种情况：

（1）不使用积分球测量量子效率时：

在样品架处放置一个散射附件，通过荧光分光光度计激发单色器和发射单色器同步扫描可以获得激发和发射两方叠加作用的光谱特征。将这个光谱特征曲线除以先前得到的激发光谱特征曲线，即可得到仪器200-600nm波长范围内的发射光谱特征。

（2）使用积分球测量量子效率时：

将荧光分光光度计样品架拆下，装上积分球。详见积荧光量子产率附件的安装介绍。通过激发单色器和发射单色器同步扫描可以获得激发和发射两方叠加作用的光谱特征。将这个光谱特征曲线除以先前得到的激发光谱特征曲线，即可得到仪器200-600nm波长范围内的发射光谱特征。

2.1、操作步骤

（1）将积分球或者散射附件装入样品室。

（2）选取光谱校正界面发射（200-600nm）选项，点击测量，系统会自动更新现有图谱。

3、发射光谱长波区域内的测量和校正

对于发射光谱而言，为了对600nm以上波长区域进行光谱校正，则需要将一个已知光谱特征的标准光源照射到发射单色器中，从而求出发射光谱长波区域内的光谱特征。选择1601272标准光源可以校正波长为500-900nm范围内的光谱。加上短波长罗丹明B的校正方法，可以校正涵盖200-900nm的波长范围。

3.1、校正所需附件及安装

（1）标准光源及电源

1601272标准光源采用稳定的直流恒流源供电，所以需要配合使用精密直流稳流电源。

3.2、电源及标准光源使用说明

（1）电源打开后预热30分钟以上。

（2）按下DISPLAY SETTING按键，点亮指示灯后，设置电压为8V，电流为1600mA,确认设定值后按下OUTPUT按键，输出指示灯点亮，此时电压窗口显示值应小于8V，电流窗口显示1600mA,稳流（CC）指示灯亮起，稳压(CV)指示灯灭，表明仪器进入稳流状态。

（3）标准光源点亮十分钟后开始定标校正。

注意：标准光源点亮时不能受到震动，因为灯丝发热时比较脆弱易变形。

（4）定标完成后，按一下复位键再断开光源两端导线，然后关闭电源。

 

3.3、操作步骤

（1）打开荧光分光光度计软件设置点击光谱校正按钮进入光谱校正界面

（2）选取光谱校正界面发射（500-900nm）选项，点击测量，系统会自动更新现有图谱。

4、光谱校正取消的方法

点击光谱校正界面恢复默认按钮即可。