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论述荧光分光光度计的原理及特征

日期:2018-03-09 16:42
    荧光分光光度计的原理 
    荧光分光光度计的定义:有些物质被紫外线或可见光激发,比激发光波发出更长的光。荧光产生的原理是化学物质能从外界吸收并储存能量并进入激发态。当从激发态恢复到基态时,多余的能量可以以电磁辐射的形式辐射。  
 
    荧光化合物的两种特征光谱  
 
    1、荧光激发光谱是通过测量荧光粉的光通量获得的光谱。它反映了不同波长诱导荧光的相对效率。 
    2、荧光发射光谱,如激发光波长和强度保持不变,使荧光物质的发射单色器照射后产生在检测器上,扫描单色仪和相应的检测波长的荧光强度,然后通过记录器记录曲线的发射波长的荧光强度,频谱表示荧光光谱。  
    该材料的激发光谱和荧光发射光谱可作为该物质的定性分析。当激发强度、波长、溶剂和温度条件固定时,物质的发射强度与物质在一定浓度范围内的浓度成正比,可用于定量分析。
    荧光分析的灵敏度一般是紫外分光光度法或比色法、溶液的浓度太大,会“自行消亡”,以及对附近的溶液的液体表面会吸收激发光,发光强度降低,导致荧光强度与浓度不到荧光分析法比例应在低浓度的溶液中进行。
    荧光发射的特点是,分子或原子能产生荧光,在接收到能量后立即发光,一旦能量停止,发光现象(荧光)瞬间消失。
    荧光的猝灭:长时间照射后,荧光分子的辐射能力会减弱甚至熄灭。这是因为激发态分子的电子不能还原为基态,吸收的能量不能以荧光的形式传递。某些化合物具有天然荧光猝灭作用,可用作猝灭剂以消除不需要的荧光。因此,应注意保护荧光物质,避免直接接触光(特别是紫外线)和与其他化合物接触。
    荧光效率:荧光分子不可能将所有吸收的光能转换成荧光,而荧光则或多或少地以其他形式释放。荧光效率是指将荧光能量吸收到荧光中的荧光分子的百分比,它与荧光光量子的发射量成正比。

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